СТВОРЕННЯ ТЕХНОЛОГІЇ ОТРИМАННЯ ФАКТОРА VIII ЗСІДАННЯ КРОВІЗ ВИКОРИСТАННЯМ МЕТОДУ АФІННОЇ ХРОМАТОГРАФІЇНА КРЕМНЕЗЕМНИХ СОРБЕНТАХ

Bìol. Tvarin, 2016, Volume 18, Issue 2, pp. 152–159

http://dx.doi.org/10.15407/animbiol18.02.152

СТВОРЕННЯ ТЕХНОЛОГІЇ ОТРИМАННЯ ФАКТОРА VIII ЗСІДАННЯ КРОВІЗ ВИКОРИСТАННЯМ МЕТОДУ АФІННОЇ ХРОМАТОГРАФІЇНА КРЕМНЕЗЕМНИХ СОРБЕНТАХ

Н. О. Шурко, Т. В. Даниш

Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам необхідно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.

ДУ «Інститут патології крові та трансфузійної медицини НАМН України»,
вул. Генерала Чупринки, 45, м. Львів, 79044, Україна, Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам необхідно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.

Технологічні процеси хроматографічного очищення широко використовуються в останні роки для фракціонування плазми крові. Впровадження іонообмінної, афінної та гель-проникної хроматографії сприяли виникненню нового покоління високоочищених та вірус-безпечних терапевтичних препаратів плазми, зокрема факторів зсідання крові.

Мета дослідження — дослідити можливість використання методу хроматографічного очищення фактора VIII на кремнеземних сорбентах з тріазиновими барвниками в якості лігандів.

У статті наведено результати досліджень очищення фактора VIII зсідання крові, яке є комбінацією попереднього фракціонування свіжозамороженої плазми з наступним етапом методу афінної хроматографії на макропористих кремнеземних сорбентах. Охарактеризовано основні переваги і недоліки використання тріазинових барвників в ролі афінних лігандів.

Запропонований метод охоплює попереднє осадження білків плазми цитратом барію, адсорбцію на гідроксиді алюмінію, відділення осаджених білків центрифугуванням і використання методу негативної афінної хроматографії на кремнеземних сорбентах: Діасорб-Активний яскраво-голубий К, Діасорб-Активний пурпуровий 4ЖТ, Діасорб-Procion Blue HB, Діасорб-Procion Gelb MXR.

Продемонстровано, що поєднання попереднього фракціонування плазми крові з методом негативної афінної хроматографії на макропористих кремнеземних сорбентах із синтетичними барвниками в якості лігандів дозволяє досягти високого ступеня очищення фактора VIII (приблизно в 100 разів). Наприклад, використання сорбенту Діасорб-Активний пурпуровий 4 ЖТ збільшує питому активність фактора VIII з 0,017±0,004 МО/мг до 1,940±0,023 МО/мг білка. Наведена технологія може бути застосована одночасно з іншими видами хроматографії у схемі препаративного отримання фактора VIII зсідання крові.

Ключові слова: АФІННА ХРОМАТОГРАФІЯ, КРЕМНЕЗЕМНІ СОРБЕНТИ, ТРІАЗИНОВІ БАРВНИКИ, ФРАКЦІОНУВАННЯ, ПЛАЗМА КРОВІ, ФАКТОР VIII ЗСІДАННЯ КРОВІ, ГЕМОФІЛІЯ А

1. Orlova N. A., Kovnir S. V., Vorobiev I., Gabibov A. G., Vorobiev A. I. Blood clotting factor VIII: from evolution to therapy. Acta Naturae, 2013, vol. 5, no. 2, pp. 19–39.

2. Nichols T. C., Raymer R. A., Franck H. W., Merricks E. P., Bellinger D. A., De Friess N., Margaritis P., Arruda V. R., Kay M. A., High K. A. Prevention of spontaneous bleeding in dogs with haemophilia A and haemophilia B. Haemophilia, 2010, vol. 16, no. 3, pp. 19–23. https://doi.org/10.1111/j.1365-2516.2010.02255.x

3. Timothy C., Nichols M. D. Lessons learned from animal models of inherited bleeding disorders. Hematology Education, 2014, vol. 8, no. 1, pp. 39–46. https://doi.org/10.1016/j.tmrv.2006.11.001

4. De Waure C., Cadeddu C., Gualano M.-R., Niolotti N., Di Nardo F., Walter R. Gestione terapeutica dell’emofilia A. Italian Journal of Public Health, 2011, vol. 8, no. 2, pp. 17–30. (in Italian)

5. Burnouf T. Modern plasma fractionation. Transfusion Medicine Reviews, 2007, vol 21, no. 2, pp. 101–117. https://doi.org/10.1016/j.tmrv.2006.11.001

6. Burnouf T. Chromatography in plasma fractionation: benefits and future trends. Journal of Chromatography, 1995, vol. 664, pp. 3–15. https://doi.org/10.1016/0378-4347(94)00532-A

7. Burnouf T., Burnouf-Radosevich M., Huart J. J., Goudemand M. A highly purified factor VIII: concentrate prepared from cryoprecipitate by ion-exchange chromatography. Vox Sanguinis, 1991, vol. 60, pp. 8–15. https://doi.org/10.1111/j.1423-0410.1991.tb00864.x

8. Radosevich M., Burnouf T. Affinity chromatography — fractionated and DNA-engineered plasma proteins. Encyclopedia of Industrial Biotechnology: Bioprocess, Bioseparation, and Cell Technology, 2009, pp. 1–12.

9. Clonis Y. D. Affinity separation: dye-ligands. Encyclopedia of Separation Science. Academic Press Ltd, London, 2000, pp. 259–265. https://doi.org/10.1016/B0-12-226770-2/00531-7

10. Osterman L. A. The chromatography of proteins and nucleic acids, Moscow, Science, 1985, 536 p. (in Russian)

11. Muller-Berghaus G., Potzsch B., Schwinn H. Method for the affinity-chromatographic purification of factor VIII. Patent US, no. 09/202,800, 2000.

12. Ro Sen S., Casoni Chiaroi M. Determination of factor VIII activity in plasma and concentrates: comparison between methods. American Clinical Laboratory, 2002, pp. 32–37.

13. Larsson P.-O. High-performance liquid affinity chromatography. Methods in Enzymology, 1984, vol. 104, pp. 213–223. https://doi.org/10.1016/S0076-6879(84)04091-X

14. Read S. M., Northcote D. H. Minimization of variation in the response to different proteins of the Commssie Blue G Dye-binding assay for proteins. Analytical Biochemistry, 1981, vol. 116, no. 1, pp. 53–64. https://doi.org/10.1016/0003-2697(81)90321-3

15. Laemmly U. K. Cleavage of structural proteins during the assemble of the head of bacteriophage T4. Nature, 1970, vol. 227, no. 5259, pp. 680–685. https://doi.org/10.1038/227680a0

16. Burnouf T., Radosevich M. Affinity chromatography in the industrial purification of plasma proteins for therapeutic use. Journual of Biochemical and Biophysical Methods, 2001, vol. 49, pp. 575–586. https://doi.org/10.1016/S0165-022X(01)00221-4

17. Shurko N. O., Danysh T. V., Novak V. L. The method of purification of coagulation factor VIII. Patent UA, no. 2906990, 2011. (in Ukrainian)

18. Scoups K. P. Current protocols in protein Science. John Wiley and Sons Inc., 1995, 3800 p.

скачати повний текст статті в форматі PDF