ЗАСТОСУВАННЯМЕТОДУ RAPD-PCR ДЛЯІДЕНТИФІКАЦІЇ МОЛОЧНОКИСЛИХ БАКТЕРІЙ
І.М.Сливка1, О.Й.Цісарик1, T.Боцер2
slyvka.88@ukr.net, tsisaryk_o@yahoo.com
1Львівський національний університет ветеринарної медицини та біотехнологій
імені С. З. Ґжицького, вул. Пекарська, 50, м. Львів, 79010, Україна
2Жешувський університет, вул. Соколовська, 26, м. Кольбушово, 36-100, Польща
Гетерогенні властивості молочнокислих бактерій (МКБ) створють значні труднощі під час їх ідентифікації. Використання генетичних методів на основі полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) уможливило швидко та якісно ідентифікувати МКБ. Метою дослідження було ідентифікувати МКБ, виділені із овечого сиру, який традиційно виготовляється в Карпатському регіоні України. Для досягнення цієї мети було використано ряд мікробіологічних і генетично-молекулярних досліджень, а саме культуральні та морфологічні властивості досліджуваних ізолятів МКБ та метод аналізу випадкової ампліфікації поліморфної ДНК (RAPD-PCR). Матеріалом для досліджень був овечий сир буц (бринза до моменту соління), виготовлений в умовах високогірної полонини Путилівського району Чернівецької області. Предметом дослідження були чисті культури МКБ, які були ізольовані із сиру.
Для порівняльного аналізу ампліфікованих фрагментів ДНК досліджуваних штамів МКБ використано референтні штами МКБ. За характером росту колоній і температурними режимами культивування досліджувані штами МКБ віднесли до родини Lactobacteriaceae та Streptococcaceae. Враховуючи морфологічні властивості ізолятів МКБ, їх віднесли до роду Lactobacterium, Lactococcus і Streptococcus.
Між досліджуваними штамами МКБ були знайдені значні відмінності у електрофоретичній рухомості, які заключалися у відсутності подібних, спільних фрагментів ДНК, а також знайдено в певних спектрах незначне число ідентичних фрагментів ДНК. Відсутність подібних профілів ДНК вказує на гетерогенність властивостей ізольованих МКБ та внутрішньовидову їх різноманітність.
Метод RAPD-PCR є доцільним щодо визначення родової спорідненості ізолятів МКБ та виявлення внутрішньовидових змін, але недостатнім для видової та штамової ідентифікації МКБ.
Ключові слова: МОЛОЧНОКИСЛІ БАКТЕРІЇ, ГЕНОТИПУВАННЯ, ПОЛІМЕРАЗНА ЛАНЦЮГОВА РЕАКЦІЯ, АМПЛІФІКАЦІЯ, ПОЛІМОРФІЗМ
