ПРОЛІФЕРАТИВНИЙ РІСТ ТА БІОХІМІЧНІ ЗМІНИ КОНДИЦІЙНОГО СЕРЕДОВИЩА ЯК ПОКАЗНИКИ ФУНКЦІОНАЛЬНОСТІ ЗА КУЛЬТИВУВАННЯ КЛІТИН ЯЙЦЕПРОВОДІВ КРОЛІВ НА МОДИФІКОВАНИХ ПОКРИТТЯХ
С.В. Федорова1, О. В. Штапенко1, І. І. Гевкан1, І. О. Матюха1, М. О. Жолобко2, О. М. Огар2, Ю. Б. Стецишин2, Ю. І. Сливчук1
Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам необхідно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.
1Інститут біології тварин НААН, Україна, м. Львів, 79034, вул. В.Стуса, 38, inenbiol@mail.lviv.ua
2Національний університет «Львівська Політехніка», 8 корпус, к. 204, пл. Святого Георгія, 2, 79013, Львів, Україна
У статті описано використання модифікованих поверхонь культурального посуду як альтернативу звичайному пластику при інтенсифікації проліферативного росту та функціональної активності культури клітин яйцепроводів кролів. Для досягнення поставлених завдань досліджень було відтворено умови функціональності клітин цієї тканини in vitro. Було відтворено таку її модель, де зберігались не тільки самі клітини, а і вся сигнальна система, яка регулює поділ, диференціацію та функціонування клітин у тканині in vivo. Культуру клітин отримували звичайним методом холодної трипсинизації, який опрацьований у лабораторії репродуктивної біотехнології та розведення тварин. Клітини культивували в інкубаторі при температурі 37 °С, 5 % СО2 за максимальної вологості повітря. Модифікацію поверхні скла здійснювали шляхом обробки скляних пластин 3-амінопропіл(триетокси)силаном (АПТЕСом), за рахунок чого на них імобілізувались первинні аміногрупи. на поверхні «чистого скла» адсорбували наношар бичачого сироваткового альбуміну (БСА) для створення біосумісних і біосенсорних поверхонь.
Порівняно вплив двох видів таких поверхонь — біогелю на основі білка і альбуміну, нанесеного методом органічного синтезу. Шляхом обрахунку індексу проліферації, проведення МТТ-тесту та біохімічних досліджень кондиційного середовища культури клітин протягом 72 годин культивування доведено, що культивування на біогелі природного походження сприяє вищій життєздатності та метаболічній активності культури за показниками активності лактатдегідрогенази та рівня глюкози у порівнянні з використанням нанопокриття з альбуміном. Отримані результати вказують на підвищення життєздатності та інтенсивності біосинтетичних процесів у культурі клітин.
Ключові слова: КУЛЬТУРА КЛІТИН, ЯЙЦЕПРОВОДИ КРОЛІВ, МОДИФІКОВАНІ ПОВЕРХНІ, ОБ’ЄМНА КУЛЬТУРА, ГЛЮКОЗА, ЛАКТАТДЕГІДРОГЕНАЗА- Brynda E., Houska M., Jirouskova M. Albumin and heparin multilayer coatings for blood-contacting medical devices. Journal of Biomedical Material Research, 2000, 51, pp. 249–257. https://doi.org/10.1002/(SICI)1097-4636(200008)51:2<249::AID-JBM14>3.0.CO;2-X
- Brynda E., Houska M. Ordered multilayer assemblies: Albumin/heparin for biocompatible coatings and monoclonal antibodies for optical immunosensors. In: Lvov Y., Mohwald H., eds. Protein Architecture: Interfacing Molecular Assemblies and Immobilization Technology. New York, Marcel Dekker, 2000, pp. 251–286
- Ladam G., Schaaf P., Decher G. Protein adsorption onto auto-assembled polyelectrolyte films. Biomolecular Engineering, 2002, 19, pp. 273–280. https://doi.org/10.1016/S1389-0344(02)00031-X
- Miksa D., Irish E. R., Chen D. Dextran Functionalized Surfaces via Reductive Amination: Morphology, Wetting, and Adhesion. Biomacromolecules, 2006, 7, pp. 557–564. https://doi.org/10.1021/bm050601o
- Rabe M., Verdes D., Seeger S. Surface-induced spreading phenomenon of protein clusters. Soft Matter, 2009, 5, pp. 1039–1047. https://doi.org/10.1039/b814053g
- Sapsford K. E., Ligler F. S. Real-time analysis of protein adsorption to a variety of thin films. Biosensors and Bioelectronics, 2004, 19, pp. 1045–1055. https://doi.org/10.1016/j.bios.2003.10.002
- Yu S. Y., Hu J. H., Pan X. Y. Stable and pH-sensitive nanogels prepared by selfassembly of chitosan and ovalbumin. Langmuir, 2006, vol. 22, pp. 2754–2759. https://doi.org/10.1021/la053158b
- Stetsyshyn Y. Study of the adsorption of albumin on the surface-modified glass by elipsometry. Scientific journal “Visnyk of L’viv University”, Biological Series, 2010, no. 54, pp. 51–58. (in Russian)
- Shtapenko O. The proliferation of cows oviduct cell culture and some biochemical parameters of the medium under the action of nickel chloride. Scientific and technical bulletin of Institute of Animal Biology and State Scientific-Research Control Institute of Veterinary Medicinal Products and Feed Additives, Lviv, 2009, 10 (1–2), pp. 342–346. (in Russian)
- Benny Abraham Kaipparettu, Isere Kuiatse1, Bonita Tak-Yee Chan1, Meju Benny Kaipparettu. Novel egg white-based 3-D cell culture system. BioTechniques, 2008, vol. 45, pp. 165–171. https://doi.org/10.2144/000112883
- Pampaloni, F., Reynaud E. G., Stelzer E. H. The third dimension bridges the gap between cell culture and live tissue. Nature Reviews Molecular Cell Biology, 2008, vol. 8, pp. 839–845. https://doi.org/10.1038/nrm2236
- Alon R., Hershkoviz E., Bayer A. Streptavidin blocks immune reactions mediated by fibronectin-VLA-5 recognition through an Arg-Gly-Asp mimicking site. European Journal of Immunology, 1993, vol. 23, pp. 893–898. https://doi.org/10.1002/eji.1830230419
- Madich A. V. Cell culture and their possible use in embryonic biotechnology. A Textbook. Kyiv, ArtEkonom, 2012, 144 p.
