Bìol. Tvarin. 2022; 24 (1): 6–10.
Received 14.12.2021 ▪ Accepted 11.02.2022 ▪ Published online 01.04.2022

Дослідження культуральних властивостей коронавірусу ВРХ штаму CV-315

А. С. Березенко1,2, Ф. С. Вабіщевич2, О. В. Годовський2, В. В. Недосєков1

Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам необхідно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.

1Національний університет біоресурсів та природокористування України,
вул. Героїв Оборони, 15, м. Київ, 03041, Україна

2ТОВ «Біотестлаб»,
вул. Володимирська, 57а, м. Васильків, Обухівський р-н, Київська обл., 08601, Україна

Метою дослідження було вивчити особливості культивування коронавірусу ВРХ штаму CV-315, виділеного на території України від хворого на коронавірусну інфекцію теляти, та підібрати оптимальні способи культивування вірусу з метою отримання вірусного матеріалу з високими титрами інфекційної активності і для розроблення технології виробництва засобів імунопрофілактики та специфічної діагностики. Під час проведення досліджень було вивчено вплив на накопичення вірусу низки факторів: наявність та концентрація трипсину в поживному середовищі, фетальної бичачої сироватки, ступеня формування моношару культури клітин за проведення зараження вірусом, а також вплив дози вірусу, температури та терміну культивування. Відповідно до отриманих результатів, було встановлено, що найбільш високу інфекційну активність штам CV-315 має за культивування впродовж 72 год. до прояву цитопатичного ефекту на 70–80% без додавання трипсину та вмістом фетальної бичачої сироватки 2% за температури 37±0,5°С. Також встановлено, що оптимальною дозою зараження є 0,1–0,01 вірусних частинок на клітину для інфікування повністю сформованого моношару культури клітин MDBK. Отримані результати буде використано для розроблення ветеринарних вакцин проти коронавірусу ВРХ.

Ключові слова: коронавірус ВРХ, культивування вірусів, культура клітин, інфекційна активність вірусів, режими культивування

  1. Berezenko A, Nedosekov V, Godovskiy O. Isolation of bovine coronavirus (BCoV) in cell cultures. Rep. NULES Ukraine. 2021; 4 (92). DOI: 10.31548/dopovidi2021.04.001.
  2. Berezenko AS, Nedosekov VV, Vabishchevych FS, Godovskiy OV. Selection of candidate strain for vaccine against bovine coronavirus production. Tech. Bull. State Sci. Res. Cont. Inst. Vet. Med. Prod. Fodder Add. Inst. Anim. Biol. 2021; 22 (2): 41–47. DOI: 10.36359/scivp.2021-22-2.04.
  3. Brandão PE, Gregori F, Heinemann MB, Lima CHA, Rosales CAR, Ruiz VLA, Jerez JA. Animal coronaviruses. Virus Rev. Res. 2001; 6 (1): 7–13. DOI: 10.17525/vrrjournal.v6i1.186.
  4. Dea S, Roy RS, Begin ME. Bovine coronavirus isolation and cultivation in continuous cell lines. J. Vet. Res. 1980; 41 (1): 30–38. PMID: 6767425.
  5. Debiaggi M, Perduca M, Romero E, Cereda PM. Phosphatidyl-serine inhibition of OC43 and NCDCV coronavirus infectivity. Microbiologica. 1985; 8 (4): 313–317. PMID: 6767425.
  6. Hansa A, Rai RB, Dhama K, Wani MY, Saminathan M, Ranganath GJ. Isolation of bovine coronavirus (BCoV) in Vero cell line and its confirmation by direct FAT and RT-PCR. Pakistan J. Biol. Sci. 2013; 16 (21): 1342–1347. DOI: 10.3923/2013.1342.1347.
  7. Inaba Y, Sato K, Kurogi H, Takahashi E, Ito Y, Omori T, Goto Y, and Matumoto M. Replication of Bovine Coronavirns in Cell Line BEK-I Culture. Archives of Virology. 1976; 50: 339–42.
  8. Kapil S, Richardson KL, Radi C, Chard-Bergstrom C. Factors affecting isolation and propagation of bovine coronavirus in Human Rectal Tumor-18 cell line. Vet. Diagnost. Invest. 1996; 8 (1): 96–99. DOI: 10.1177/104063879600800115.
  9. Mebus CA, Stair EL, Rhodes MB, Twiehaus MJ. Neonatal calf diarrhea: propagation, attenuation, and characteristics of a coronavirus-like agent. J. Vet. Res. 1973; 34 (2): 145–150. PMID: 4568246.
  10. Okulova ON, Dumova VV, Mishchenko VA, Ponomarev AP. Bovine coronavirus reproduction in the continuous cell cultures at a temperature of 34 degrees C. Issues. 2007; 52 (4): 37–40. PMID: PMID: 17722610.
  11. Reed LJ, Muench H. A simple method of estimating fifty per cent endpoints. J. Epidemiol. 1938; 27 (3): 493–497. DOI: 10.1093/oxfordjournals.aje.a118408.
  12. Saif LJ, Heckert RA, Miller KL, Tarek MM. Cell culture propagation of bovine coronavirus. Tissue Cult. Method. 1988; 11 (3): 139–145. DOI: 10.1007/BF01404267.
  13. Storz J, Rott R, Kaluza G. Enhancement of plaque formation and cell fusion of an enteropathogenic coronavirus by trypsin treatment. Immun. 1981; 31 (3): 1214–1222. DOI: 10.1128/iai.31.3.1214-1222.1981.

Search